1 Bachelorarbeit-Konietzke-2009.pdf 1486160 25d2fc89a747bc2d27d68c2ef92da4a9 dbhsnb/thesis2009-0006 606749144 MODS updated during DBHSNB migration in Mai 2022 Hochschulschrift Madlen Konietzke aut VerfasserIn Aufbau eines Sporulationsnachweises als in- Prozesskontrolle für die Herstellung rekombinanter Proteine in Bacillus subtilis de Karl Steffens Prof. Dr. dgs AkademischeR BetreuerIn Tanno Hübel Dipl. Ing. dgs AkademischeR BetreuerIn Hochschule Neubrandenburg Neubrandenburg 2009 monographic 2009 2009 Hochschulbibliothek Neubrandenburg Neubrandenburg 2009 2009 Hochschulbibliothek Neubrandenburg https://digibib.hs-nb.de/resolve/id/dbhsnb_thesis_0000000109 Bacillus subiltis ist ein interessanter Wirt für die Herstellung rekombinanter Proteine, da Zielproteine in das extrazelluläre Medium sekretiert werden können, er nicht pathogen ist, keine Endotoxine ausbildet und sehr gut charakterisiert ist. Jedoch ist Bacillus subtilis in der Lage bei äußerlichen Stresseinwirkungen, wie z.B. Nahrungsmangel in widerstandsfähige Überlebensformen überzugehen, den Sporen. Die Bildung von Sporen ist in Prozessen für die Produktion rekombinanter Proteine unerwünscht. Ziel der Arbeit ist es daher, einen Sporulationsnachweis als In- prozess Kontrolle zu erstellen. Da die Sporenform von Bacillus subtilis sehr hitzeresistent ist, wohingegen die vegetativen Zellen schon bei geringen Temperaturen absterben, soll dieser Test auf Basis einer Erhitzung erfolgen. Zur Ermittlung der erforderlichen Temperatur um vegetative Bacillus subtilis Zellen abzutöten wurde ein sporulationsdefizienter Stamm verwendet. Im Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass bei einer Erhitzung von 80 °C für 30 min vegetativen Zellen abgetötet werden, während Sporen diese Erhitzung überleben. Aufgrund dieser Daten wurde ein Sporulationsnachweis entwickelt. In einer Bacillus subtilis WB800 Kultur wurden nach 8 Stunden erste Sporen nachgewiesen. Bacillus subtilis is an attractive host for the production of recombinant proteins. It is capable of secreting functional extracellular proteins directly to the culture medium; it is non-pathogenic; it does not produce any endotoxins; and a great deal of vital information has now been acquired. However, in a position to external stress agents, for example nutrient shortage, Bacillus subtilis is able to develop resistant survival forms, the spores. Spore formation is an unwanted effect while production processes. Aim of this work is to develop a procedure to detect spores as an in- process- control. While spores are resistant to high temperatures, vegetative cells are not. Thus, a detection method for spores based on inactivation of vegetative cells by heating was developed. To determine required conditions to inactivate Bacillus subtilis cells, a Bacillus subtilis strain deficient in spore formation was used. It was shown that cells were efficiently inactivated at 80 °C for 30 minutes whereas spores survived these conditions. Spore formation in a culture of Bacillus subtilis WB800 was determined after 8 h. Bacillus subtilis Sporulation rekombinante Proteine Herstellung 660 Technische Chemie Fachbereich Agrarwirtschaft und Lebensmittelwissenschaften 10115485-9 Hochschule Neubrandenburg 01.09.2005 - dgg Grad-verleihende Institution 6083865-6 Hochschule Neubrandenburg Fachbereich Agrarwirtschaft und Lebensmittelwissenschaften dgg Grad-verleihende Institution urn:nbn:de:gbv:519-thesis2009-0006-1 frei zugänglich (Open Access) Lizenz Metadaten: CC0 Nutzungsrechte erteilt alle Rechte vorbehalten 2009-06-12T11:13:39.166Z 2022-05-05T12:39:05.576Z editorT administrator